免疫組化試劑盒是一種用于生物樣本分析的工具,常用于檢測特定抗原或蛋白質在組織或細胞中的分布和表達。通過使用這種試劑盒,可以在組織切片或細胞涂片中標記出目標分子,從而幫助科學家、醫生和研究人員了解疾病的機制、診斷病理、或研究特定生物標志物。 基本原理:
免疫組化技術通過抗原-抗體反應來進行檢測。該試劑盒通常包含抗體、顯色劑、抗原修復液、封閉液等。具體操作是將目標抗體(針對特定蛋白質或抗原)與樣本中的抗原結合,并通過某種顯色反應使目標位置顯現出來,最終通過顯微鏡觀察結果。
常見應用:
病理診斷:通過免疫組化分析,病理學家可以識別癌癥或其他疾病相關的生物標志物。
細胞研究:檢測特定蛋白在細胞內的分布。
臨床研究:幫助了解不同疾病狀態下的分子機制。
免疫組化試劑盒的使用方法
1.切片,烤片60℃1h。
2.脫蠟及復水。
3.PBS浸洗3次,每次3min。
4.抗原修復。(一般來說,常見的修復方式有:EDTA、檸檬酸、蛋白酶K,可根據一抗進行選擇。)
5.PBS浸洗3次,每次3min。
6.30%H2O2(1000μlPBS+200μl30%H2O2)室溫避光孵育15min。
7.PBS浸洗3次,每次3min。
8.加適量山羊血清封閉15min,覆蓋住樣本即可。
9.滴加一抗,4℃過夜孵育。
10.PBS浸洗3次,每次3min。
11.滴加抗小鼠生物素化二抗(使用濃度為1:100-1:300),37℃孵育1h。
12.PBS浸洗3次,每次3min。
13.滴加HRP標記鏈霉親和素三抗(使用濃度為1:100-1:300),室溫孵育30min。
14.PBS浸洗3次,每次3min。
15.DAB顯色5min。(900μlPBS+50μl20xDAB顯色液A+50μl20xDAB顯色液B)
16.蒸餾水浸洗。
17.蘇木素復染2-3min。
18.用1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水返藍。
19.脫水透明。
20.中性樹膠封片。